配置緩沖液的方法與技巧
更新時間:2023-08-29 點擊次數(shù):850次
今天,艾偉拓團隊要向您推薦一款操作簡便且復現(xiàn)性較好的緩沖液配制方法:
使用氨丁三醇(Tris)及鹽酸氨丁三醇(Tris-HCl)固體粉末進行配制。
Tris緩沖體系被廣泛應用生物制劑研發(fā)與生產(chǎn)過程中,例如目前已上市的兩款mRNA xin'guan疫苗均選用Tris/Tris-HCl作為其制劑緩沖體系,此外該緩沖體系還廣泛用于抗體蛋白純化等生物制劑生產(chǎn)環(huán)節(jié)。
使用時,可根據(jù)目標濃度及pH,計算并直接稱取兩種固體粉末混合,溶解定容,至于兩種固體粉末的用量如何確認,您可以參考以下實驗步驟以及艾偉拓實驗室實測值,通過一個簡單的預實驗進行確認:
1. 分別配制目標濃度的Tris與Tris-HCl(這里以0.1mol/L為例)
2.兩種溶液分別取不同體積混合成相同體積(這里以100mL為例)的緩沖液,測定溶液pH
待摸索出兩種溶液適宜比例后,根據(jù)計劃配置的緩沖液體積,倒算兩種固體粉末的用量。
基于該方法,我們復現(xiàn)了Moderna的新冠mRNA疫苗中的Tris緩沖溶液,pH理論值為7~8,實測值為7.47(注:該實測值為溶液中僅包含Tris/Tris-HCl,不含mRNA-LNP及其他輔料情況下的pH值)。
該方法的優(yōu)勢是操作簡便,只需稱取及溶解兩步,在外界溫度及溶液濃度相同的情況下,復現(xiàn)性較好,且無需使用濃鹽酸等嚴格受限的試劑。
使用該方法配置Tris/Tris-HCl緩沖液的注意事項如下:
①濃度及溫度對Tris緩沖液pH均有較大影響,建議做上述實驗時,保持與實際使用場景相同的溫度與濃度,并在配置完成后第一時間進行測量,避免二氧化碳的干擾。
②若變更使用濃度或環(huán)境溫度,需重新進行上述實驗。
③為避免Tris-HCl含量波動等因素造成配置的緩沖液pH不穩(wěn)定,建議采購質(zhì)量可靠的藥用級Tris及Tris-HCl產(chǎn)品。
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